Objectiu
Avaluar l’efecte de canvis osmòtics del plasma sobre l’eritròcit.
Introducció
L’eritròcit com a osmòmetre
A causa de la marcada susceptibilitat dels eritròcits davant les petites variacions de la concentració de partícules osmòticament actives en el medi que els envolta, l’eritròcit perd o guanya líquid amb relativa facilitat. Els canvis provocats en el volum cel·lular per efecte de dissolucions de diferent concentració osmòtica poden comprovar-se fàcilment mitjançant la determinació de l’hematòcrit. Aquesta prova posa de manifest la necessitat de controlar acuradament els factors o elements que puguin modificar la composició del medi amb el qual es posen en contacte els eritròcits, per evitar errors o variacions importants a l’hora de determinar l’hematòcrit d’una mostra de sang.
Els canvis en el volum cel·lular dels eritròcits depenen de la concentració osmòtica del medi extern respecte al citoplasma cel·lular (aproximadament 300 mOsm o una concentració de NaCl del 0.9\%.
Desenvolupament
Detectar la susceptibilitat dels eritròcits davant de petites variacions de la concentració osmòtica del medi.
Valorar els canvis provocats en el volum cel·lular per efecte de dissolucions de diferent concentració osmòtica del medi.
Material
Centrífuga microhematòcrit
Pipetes i puntes
Procediment
Es preparen tres concentracions osmòtiques (50, 150, 400 mM de NaCl) en diferents tubs d'assaig: és col·loca 0,125 ml de cadascuna de les dissolucions següents de NaCl i s'hi afegeix 0,25 ml de sang, mantinguda incoagulada, a cada un dels tres tubs:
Tub | Dissolució | Sang |
|---|---|---|
1 | 0,125 mL de 50 mM NaCl | 0,25mL |
2 | 0,125 mL de 150 mM NaCl | 0,25 mL |
3 | 0,125 mL de 400 mM Na Cl | 0,25 mL |
Es deixen en repòs durant 1 minut. Cal agitar els tubs invertint-los suaument.
Per capil·laritat, es transfereix una mostra de cada sang a tubs capil·lars de microhematòcrit i es valora l'hematòcrit en cada cas.
Relacionar el valor obtingut de Hc (%) amb la concentració osmòtica del medi on s'ha posat en contacte la mostra inicial de sang.
Valors de referència
Els comportaments principals del medi són:
- Medi isotònic: El volum cel·lular es manté constant. La concentració de soluts dins i fora de la cèl·lula és la mateixa.
- Medi hipotònic (<300 mOsm): L'aigua entra a l'eritròcit per òsmosi. La cèl·lula s'infla, augmentant de volum i adoptant una forma esfèrica fins que pot arribar a rebentar, un procés conegut com a hemòlisi.
- Medi hipertònic (>300 mOsm): L'aigua surt de l'eritròcit cap al medi. La cèl·lula es deshidrata, es contrau i la seva membrana es plega, un fenomen anomenat crenació.
Els valors de referència de la concentració osmòtica eritrocitària (també coneguda com a fragilitat osmòtica) mesuren la resistència dels glòbuls vermells a l'hemòlisi en solucions salines (ClNa) hipotòniques.
Aquests valors s'avaluen mitjançant dos punts clau a la corba de fragilitat:
- Hemòlisi inicial: entre 0,45% i 0,47% de concentració de NaCl
- Hemòlisi completa (total): Entre 0,30% i 0,33% de concentració de NaCl
Els rangs normals d'osmolalitat plasmàtica general oscil·len entre 275 i 295 mOsm/kg.
